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目的检测Α烯醇酶（ΑENOLASE，ENO1）在胃癌组织的表达水平，研究ENO1表达与胃癌进展的相关性通过体外实验，研究ENO1对胃癌细胞株AGS增殖、迁移等恶性生物学行为的影响，为揭示ENO1与胃癌发生、发展的关系提供实验依据。方法1采用免疫组织化学法，检测ENO1在不同病理进展的胃癌组织的表达情况利用ENO1兔抗人多克隆抗体对22例胃腺癌标本、18例正常胃黏膜组织标本和20例非典型增生组织标本进行了免疫组化检测，观察ENO1在胃癌组织的表达水平。2克隆人ENO1基因，构建线基因序列GENBANKNM0014283设计引物，扩增ENO1基因编码区序列，并采用TA克隆法将目的基因连接于PMD18T载体。限制性内切酶ECOR1和XBA1分别双酶切PMD18T/ENO1和线，体外连接构建线线经脂质体（LIPOFECTAMINETM2000）转染胃癌细胞株AGS，实时荧光定量RTPCR和WESTERNBLOT检测ENO1MRNA和蛋白在AGS细胞内的表达水平。4通过CCK8细胞增殖实验、平板集落形成实验和细胞划痕实验，研究过表达ENO1基因对AGS细胞增殖、迁移能力的影响。5合成针对ENO1基因的小干扰RNASIRNA，转染AGS细胞，通过CCK8细胞增殖实验、平板集落形成实验和细胞划痕实验，研究SIRNA干扰ENO1基因表达对AGS细胞增殖、迁移能力的影响。结果1ENO1在胃癌组织的表达免疫组化的检测结果显示，ENO1的高表达率在胃腺癌中为272％6/22，而在正常胃黏膜组织和非典型增生组织中均为0％。ENO1在胃腺癌组织的表达水平与正常胃黏膜组织和非典型增生组织相比，差别具有统计学意义HC2270，P＜005。2线的构建RTPCR扩增获得ENO1基因的编码区序列1305BP，琼脂糖凝胶电泳和测序证实与预期序列一致利用基因工程技术，体外连接ENO1基因与载体PCDNA31，构建线，并经琼脂糖凝胶电泳和测序证实构建成功。3ENO1基因过表达对AGS细胞增殖、迁移能力的影响将线分别转染AGS细胞，实时荧光定量RTPCR和WESTERNBLOT发现，PCDNA31/ENO1组较空载体PCDNA31组相比，ENO1基因MRNA和蛋白表达量高。同时，CCK8细胞增殖实验发现，在转染的72小时，PCDNA31/ENO1组细胞增殖水平高于PCDNA31空载体组T344，P＜005平板集落实验发现，10天后，PCDNA31/ENO1组集落形成数量明显高于PCDNA31组（T526，P＜005）细胞划痕实验发现，在48个小时后，PCDNA31/ENO1组划痕愈合速度快于空载体PCDNA31组（T735，P＜005），差异具有统计学意义。4SIRNA干扰ENO1基因表达对AGS细胞增殖、迁移能力的影响将针对ENO1基因的小干扰RNA（ENO1SIRNA）和空白对照（NCSIRNA）分别转染AGS细胞，实时荧光定量RTPCR和WESTERNBLOT发现干扰组ENO1SIRNA与空白对照组NCSIRNA相比，ENO1基因MRNA和蛋白表达量较低。同时，CCK8细胞增殖实验发现，在转染的72小时，ENO1SIRNA组细胞增殖水平低于NCSIRNA空载体组T250，P＜005平板集落实验发现，10天后，ENO1SIRNA组集落形成数量明显低于NCSIRNA组T2205，P＜005细胞划痕实验显示，在48个小时后，ENO1SIRNA组划痕愈合速度慢于空白对照组NCSIRNAT854，P＜005，差异具有统计学意义。结论1ENO1在胃癌组织的表达水平明显高于正常胃黏膜组织和非典型增生组织，提示ENO1表达与胃癌的进展有关2体外实验发现，过表达ENO1基因可使胃癌AGS细胞的增殖及迁移能力增强SIRNA干扰ENO1基因表达，可使AGS细胞的增殖及迁移能力减弱，提示ENO1可能是与胃癌细胞增殖及迁移密切相关的分子靶标。
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